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    過氧化氫(H2O2)測試盒微量法

    簡要描述:過氧化氫(H2O2)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:LB肉湯 英文名稱:LB Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g LB營養(yǎng)瓊脂 英文名稱:LB Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 苯丙脫氨 英文名稱:Phenylalanine Deaminase Medium 產(chǎn)品規(guī)格:1ml*20 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB) 英文名稱:Eosin-Methylene Blue Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g

    • 產(chǎn)品型號:
    • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
    • 更新時(shí)間:2023-12-29
    • 訪  問  量:1219

    詳細(xì)介紹

    特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

    產(chǎn)品名稱:過氧化氫(H2O2)測試盒微量法

    產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

    檢測方法:微量法

    產(chǎn)品貨號:BK-01S6408

    產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
    商品介紹:

    測定意義:

    H2O2是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子,主要由SODXOD等催化產(chǎn)生,由CATPOD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面,H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸,蛋白質(zhì)等生物大分子,并使細(xì)胞膜遭受損害,從而加速細(xì)胞的衰老和解體;另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

    測定原理:

    H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物,在415nm有特征吸收。

    需自備的儀器和用品:

    可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。

    所需的儀器和用品:

    可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

    四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

    建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

    樣本和試劑浪費(fèi)!

    1、樣本制備

    組織樣本:

    取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

    勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

    【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

     

    細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

    先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

    提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

    12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

    4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

    QQ截圖20220307153537.png 

    實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

    選擇抗凝的注意點(diǎn):

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測定。

    10mg 氨甲喋呤 Amethopterin -20℃保存

    2 ug pFLAG-CMV-3 pFLAG-CMV-3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基(TTB) Tetrathionate Broth Base 250g

    1瓶 Ehrlich細(xì)胞株 Ehrlich 低溫運(yùn)輸和保存

    VRB-MUG瓊脂  100g

    10000U MMLV逆轉(zhuǎn)錄 MMLV Reverse Transcriptase -20℃保存

    250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.0   Phosphate Buffer,0.5M, pH7.0   常溫保存

    20次 一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài)) One-Stop AT Cloning Kit -20℃保存

    2 ug pAP-1-Luc pAP-1-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    200 mL 大鼠淋巴細(xì)胞分離液1.083 Cell Separation Solution -20℃保存

    1瓶 VERO C1008(E6)細(xì)胞株 VERO C1008(E6) 低溫運(yùn)輸和保存

    過氧化氫(H2O2)測試盒微量法PRMT6  組蛋白甲基轉(zhuǎn)移6抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Rabbit Anti-chicken IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

    IGFALS/ALS  胰島素樣生因子酸不穩(wěn)定亞基ALS抗體 規(guī)格: 0.2ml

    phospho-Tau protein(Ser404)  磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Phospho-Jak3 (Tyr785)  磷酸化蛋白酪激JAK-3抗體 規(guī)格: 0.1ml

    SCN11A/NAV1.9  鈉通道蛋白11α抗體 規(guī)格: 0.2ml

    GNRPX/PLEKHJ1  核苷酸結(jié)合蛋白X抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Bio  標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3ml

    PERK  蛋白激樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激抗體 規(guī)格: 0.2mlG3BP1  Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

    phospho-IRS1(Thr176)  磷酸化胰島素受體底物1抗體 規(guī)格: 0.1mlACADVL  ?;oA脫很鏈抗體 0.2ml

    SEMA4D/CD100  臂板蛋白4D抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

    human Fibrinogen  抗體 規(guī)格: 0.2mlFactor X  凝因子10抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Somatostatin/GRIH  生抑素抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Ack1(Tyr326)  磷酸化Ack1抗體 0.1ml 

    注意事項(xiàng):

    1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

    2、對照管只需要做一管。

    3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

    4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

    對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

    若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

     


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